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          一招變身檢測熒光達人

          作者: 時間:2014-01-08 來源:網絡 收藏

            讓我們再來看一個激發(fā)塊的光譜圖:

          上圖為olympus U-FGW激發(fā)塊的光譜信息,可以看出此激發(fā)塊可以提供的激發(fā)光在530-560nm左右,允許透過的熒光光譜范圍在570nm以上,所以此激發(fā)塊并不適合DAPI激發(fā)。如果用此激發(fā)塊來做DAPI的觀察,就會出現(xiàn)看不到熒光的現(xiàn)象。

            可見,要選擇合適的熒光激發(fā)塊,我們首先要知道熒光染料激發(fā)和發(fā)射光的波長特性和激發(fā)塊光譜的各項數(shù)據(jù)。但是,熒光染料和濾色片的種類非常多,用戶往往沒有渠道來獲取這些信息。在實際實驗中使用熒光顯微鏡時,因為熒光激發(fā)塊配置錯誤而得不到好的觀察效果的現(xiàn)象經常發(fā)生,對于用戶來說是一件非常煩惱的事。

            為了方便用戶正確選擇激發(fā)和,節(jié)省時間,日本理化研究所腦科學所-奧林巴斯合作中心(the RIKEN BSI-Olympus Collaboration Center : http://rikenbocc.brain.riken.jp/index_e.html)開發(fā)了軟件Spectrum Manager。用戶選擇熒光染料,軟件會給出染料的光譜信息和推薦的濾色片選擇等信息,使用非常方便。

            還可利用Data Manager自行對光源信息、染料數(shù)據(jù)庫或濾色片信息進行更新。

            此款軟件已經整合至奧林巴斯共聚焦顯微鏡的一款軟件中,發(fā)布以來得到了用戶非常好的反響。因此,現(xiàn)將該軟件開放給所有顯微鏡使用者,供大家免費使用。

            下載地址:http://cn.olympus.com/smkx_second/second.aspx?nodeid=187page=ContentPagecontentid=1011

            由于是針對共聚焦顯微鏡的軟件,所以軟件中僅提供了激光光源譜線。如果您有需要,也可以將汞燈和氙燈光源信息導入至軟件。

            以下提供普通熒光顯微鏡常用的汞燈和氙燈光源的圖譜,供大家參考。

            汞燈在313, 334, 365, 406, 435, 546, and 578nm有比較好的激發(fā)峰。

            氙燈在可見光光譜范圍內強度更穩(wěn)定(沒有像汞燈那樣的光譜峰值),在紅外波段比汞燈強度高。但在紫外波段有一定的缺陷性。

            所以選擇光源時,光源特性要與我們的具體應用相匹配。


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